倒平板就是培養平板培養基倒置。平板要求:平板平整,無凸起;平板無“掛壁”;培養基布滿整個平皿;培養基的量適宜;培養皿蓋無水汽。溫度在45度左右,最適合倒平板。如果要連續倒多個培養皿,尤其是在冬天往往容易凝固,一旦凝固則需要再加熱到較高溫度才能融化。
一、防止倒皿時的冷凝
有經驗的都知道,手心不燙手背燙,這是一個經驗數據,此時的溫度在45度左右,最適合倒平板。如果要連續倒多個皿,尤其是在冬天往往容易凝固,一旦凝固則需要再加熱到較高溫度才能融化(玻璃體的特性)。所以建議此時有個50度的恒溫水浴開著,隨時把裝培養基的三角瓶放進去效果會好不少。
二、培養皿中有冷凝水
一般來說,都會有幾滴,影響不大。如果過多則需要注意。大概的情況是:倒皿前將平皿最好保持在35-40度的溫度(觸手有溫熱感);保持平皿靜置環境溫度高一些。
三、倒已冷卻的瓊脂培養基
對已冷卻的培養基再融化頗感頭痛心煩,因為放在電爐上烤不僅需要耐心,還得加上小心,一不留神就會沖濕瓶塞;重新放入滅菌鍋加熱吧,好是好,可又嫌費事。解決方法是用微波爐加熱,又快又好,融得徹底,用著放心。當然,裝培養基所用的三角瓶得能夠放入微波爐才行(250ml)。
沒有微波爐怎么辦?用電爐要小心了,在電爐上直接加熱融化營養瓊脂時應注意在融化到上面剩最后薄薄的一層時應用小火,緩慢加熱,防止氣體沖破薄層時導致爆沸,營養瓊脂沖出三角瓶。
四、倒平皿保持均一性
傾注平皿要左三圈,右三圈的晃動,注意不要把平皿蓋沾上,并且要輕輕晃動。
五、具體對待
前面幾點講了倒平皿的最適溫度保持在35-40度,但不同品牌的瓊脂質量不一樣,同樣按照國標中的配方瓊脂含量1.5%,有些瓊脂凝固很快,有些凝固慢一些,還有環境溫度偏低,瓊脂凝固也會快一些,要根據實際情況,適當調整瓊脂的含量,在室溫較低時我們所配的培養基瓊脂用量就偏少一些,還有在倒平板和混勻時動作要快一些,室溫實在太低,也可以把培養皿放到烘箱中適當加熱一下(40度左右)。
六、避免氣泡
在倒平板時會產生氣泡,主要遵守以上各點,加熱不要過高,融化即可,加強操作練習,還有就是倒的時候要慢點,最好能夠貼著平皿的壁倒下去。
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