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雙縮脲試劑檢測蛋白質(zhì)原理

2021-12-13 14:50:46文/董玉瑩

雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí),試液中的銅與多肽配位,絡(luò)合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/mL。

雙縮脲試劑檢測蛋白質(zhì)原理

雙縮脲試劑檢測蛋白質(zhì)評(píng)價(jià)

優(yōu)點(diǎn):雙縮脲法測定蛋白質(zhì)的測定范圍是1~10mg蛋白質(zhì),操作簡單、快捷。既適合手工操作,又適合自動(dòng)化分析,重復(fù)性好、線性關(guān)系好, 雙縮脲試劑可以長期保存( 若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn),則需要重新配制)。

缺點(diǎn):靈敏度差,測定范圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。干擾測定的物質(zhì)包括有:在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽性呈色反應(yīng),銅離子也容易被還原,有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀。

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